艾柏森重组头孢菌素酶
艾柏森重组头孢菌素酶
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一、产品概述

头孢菌素酶,学名为AmpC β-内酰胺酶,属于β-内酰胺酶家族中的C类成员。它能够特异性识别并水解头孢菌素类抗生素分子结构中的β-内酰胺环,使抗生素失去杀菌活性——这正是细菌对头孢类药物产生耐药性的主要机制之一。

艾柏森重组头孢菌素酶(Recombinant Cephalosporinase)采用原核大肠杆菌表达系统高效表达,经多步纯化工艺制备而成。产品具有超高酶活、高纯度、低内毒素、杂质控制严格等特点,是抗生素残留检测、耐药机制研究、新药筛选及诊断试剂开发等领域的核心工具酶。

二、产品基本信息

项目内容
产品名称重组头孢菌素酶(Recombinant Cephalosporinase)
产品类别β-内酰胺酶类 / 水解酶
表达体系原核大肠杆菌表达系统(E. coli)
分子量约38-42 kDa(SDS-PAGE)
货号CSP-001 / CSP-005 / CSP-010
规格1 mg / 5 mg / 10 mg / 定制规格
外观白色至淡黄色冻干粉末
储存条件-20°C 避光保存
有效期24个月(-20°C 未开封)

三、产品核心优势

1. 超高酶活,用量更省

实测酶活12,500万U/mg,远超≥10,000万U/mg的行业标准。极低用量即可实现抗生素的完全水解,单次实验成本大幅降低。

2. 高纯低内毒,数据更可靠

SDS-PAGE纯度97.2%,内毒素仅0.08 EU/mg,满足细胞实验与体内研究的严格要求,避免杂蛋白与内毒素干扰实验结果。

3. 杂质控制严格,背景更干净

宿主蛋白残留仅56 ppm,宿主DNA残留仅3.2 ng/dose,双双远低于标准限值,从源头消除背景干扰。

4. 稳定性卓越,长效可靠

-20°C保存24个月酶活保留率≥98%;2-8°C存放7天酶活保留率≥95%;37°C工作温度4小时酶活保留率≥90%;反复冻融3次酶活保留率≥95%。

5. 底物谱广,一酶多用

对头孢噻呋、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶、头孢呋辛、头孢氨苄、头孢唑林等多种一至三代头孢菌素均表现高水解活性。

6. 原核表达,忠实于天然构象

采用大肠杆菌原核表达系统,避免了真核系统可能引入的非天然糖基化修饰,产物结构更贴近天然酶,催化活性更真实可靠。

四、应用领域详解

1. 抗生素残留检测

头孢菌素酶可特异性水解食品、环境水样及生物样品中的头孢类抗生素残留,配合HPLC/LC-MS等分析手段,实现痕量残留的精准定性定量检测,在食品安全监管与环境保护领域具有重要应用价值。

2. β-内酰胺酶耐药性研究

作为AmpC型β-内酰胺酶的标准品与研究对象,头孢菌素酶是揭示细菌耐药机制、评估耐药表型、开发新型β-内酰胺酶抑制剂的必备工具酶。

3. 新药研发与筛选

在新型头孢类抗生素及β-内酰胺酶抑制剂的研发中,头孢菌素酶用于评估药物的酶解稳定性、筛选抑制剂活性、优化药物结构,是药物早期筛选与体外评价的核心试剂。

4. 诊断试剂开发

用于开发头孢类抗生素耐药快速诊断试剂盒,辅助临床快速判断患者感染的细菌是否产AmpC酶,指导精准用药方案制定。

5. 工业级生物催化

在制药工业中,头孢菌素酶可用于头孢类抗生素中间体的酶法合成或结构修饰,替代传统化学法,绿色环保、条件温和、选择性高。

五、使用操作方法

5.1 产品复溶

  1. 取出冻干粉产品,在室温下平衡10-15分钟。

  2. 根据所需浓度,加入适量无菌缓冲液(推荐:50 mM磷酸缓冲液pH 7.5或PBS pH 7.4)溶解冻干粉。

  3. 轻柔颠倒混匀或低速涡旋,避免剧烈振荡产生气泡,室温放置5-10分钟确保完全溶解。

  4. 如有少量不溶物,可于4°C离心5分钟(3000 rpm),取上清液使用。

5.2 推荐反应体系

组分浓度/用量备注
磷酸缓冲液(pH 7.5)50 mM反应基础缓冲液
头孢噻呋底物0.1-0.5 mM根据实验目的调整
重组头孢菌素酶0.01-0.1 mg/mL根据酶活和底物浓度调整
反应温度37°C最适工作温度
反应时间5-30分钟视底物浓度和酶用量而定

5.3 酶活测定方法

采用紫外分光光度法,以头孢噻呋为标准底物:

  1. 将头孢噻呋溶解于50 mM磷酸缓冲液(pH 7.5),终浓度0.2 mM。

  2. 将重组头孢菌素酶稀释至0.01-0.1 mg/mL。

  3. 设置检测波长260 nm或290 nm,温度37°C。

  4. 取0.9 mL底物溶液于比色杯,37°C预孵育2分钟。

  5. 加入0.1 mL酶溶液,迅速混匀,记录吸光度变化。

  6. 连续监测5-10分钟,计算初始反应速率。

酶活力定义:在37°C、pH 7.5条件下,每分钟水解1 μmol头孢噻呋所需的酶量为1个活力单位(1 U)。

5.4 抗生素残留消除操作步骤

  1. 取待测样本(血清、尿液、乳品等)适量。

  2. 按1:100-1:500(体积比)加入重组头孢菌素酶溶液。

  3. 37°C孵育15-30分钟,确保抗生素完全水解。

  4. 孵育后样本可直接用于下游检测,无需额外处理。

六、储存与运输要求

6.1 储存条件

状态储存条件有效期
冻干粉-20°C 避光保存24个月
复溶后液体-20°C 分装保存建议单次用量分装
复溶后液体2-8°C 短期保存不超过7天

6.2 反复冻融

反复冻融不超过3次,超过3次可能导致酶活下降。建议按单次用量分装保存。

6.3 运输条件

产品运输采用冷链物流,冻干粉状态运输温度-20°C或2-8°C(短途)。运输过程中确保包装完整、温度可控。产品到达后请立即按推荐条件储存。

七、常见问题与解决方案

Q1:产品复溶后出现少量泡沫,是否影响使用?

A:轻微泡沫为正常现象,静置数分钟后泡沫可自行消退,不影响酶活和使用效果。

Q2:如何确定最佳酶用量?

A:建议根据样本中抗生素的预估浓度,参考推荐比例进行预实验,逐步优化酶用量。一般抗生素浓度越高,酶用量越大。

Q3:酶处理后样本是否需要额外纯化?

A:大多数情况下,酶处理后样本可直接用于下游检测。如检测方法对酶蛋白敏感,可通过超滤或离心去除酶蛋白。

Q4:产品能否水解青霉素类抗生素?

A:本产品对青霉素类抗生素有较弱的水解活性(相对活性约30%),主要用于头孢菌素类抗生素的水解。如需高效水解青霉素,建议使用专用青霉素酶产品。

Q5:产品批次间是否存在差异?

A:本产品采用标准化生产工艺,批次间酶活差异控制在±15%以内。每批次产品均附有COA报告,标注实测酶活值。

Q6:能否提供定制规格?

A:可以。艾柏森可根据客户需求提供不同规格、浓度、缓冲液配方的定制产品,请联系技术支持团队。

八、安全信息

1. 用途限制

本产品仅供科研、诊断及工业用途,不得直接用于人体或动物体内治疗。

2. 操作注意事项

  • 操作过程中请佩戴实验手套,避免皮肤直接接触产品。

  • 不同应用场景下,建议进行预实验以确定最佳酶用量和反应条件。

  • 如发现产品外观异常(变色、浑浊、沉淀等),请勿使用并及时联系供应商。

3. 废弃物处置

产品废弃时应按照实验室生物废弃物处理规范执行。

4. 过敏提示

虽然本产品为重组表达、无动物源成分,但对酶类产品敏感的操作者仍建议采取适当防护措施。

九、订购与技术支持

艾柏森(江苏)生物科技有限公司致力于为全球客户提供高品质的重组蛋白酶产品与专业技术服务。

订购信息

  • 货号:CSP-001(1 mg)/ CSP-005(5 mg)/ CSP-010(10 mg)

  • 规格:1 mg / 5 mg / 10 mg / 定制规格

  • 形式:冻干粉(标准) / 液体(定制)

定制服务

可根据客户需求提供不同规格、浓度、缓冲液配方及标签蛋白的定制生产。

技术服务

提供COA报告、产品使用指导、酶活测定方案开发及批量定制服务。

联系方式

  • 公司名称:艾柏森(江苏)生物科技有限公司(ABIOCENTER)

  • 咨询电话:0510-8599 6916

  • 表达体系:E. coli 原核大肠杆菌表达