一、产品概述
α-糖苷酶(α-Glucosidase,EC 3.2.1.20)是一类能够特异性水解末端非还原性α-1,4-糖苷键的酶,能够从淀粉、糖原、麦芽糖等碳水化合物的非还原末端逐步释放葡萄糖单元。该酶在生物体内参与食物消化、能量代谢及细胞信号调控等关键生理过程,是糖代谢通路中的重要节点。
艾柏森(江苏)生物科技有限公司采用先进的原核大肠杆菌重组表达系统,经过基因序列优化、高效表达载体构建和多步纯化工艺,成功开发出高纯度、高活性的重组α-糖苷酶产品(货号:ABIO-AG-E001),为科研与工业用户提供稳定可靠的酶学工具。
二、产品基本信息
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | α-糖苷酶(重组表达) |
| 英文名称 | α-Glucosidase (Recombinant) |
| 产品货号 | ABIO-AG-E001 |
| EC编号 | EC 3.2.1.20 |
| 表达宿主 | 大肠杆菌(E. coli) |
| 来源 | 重组表达,非动物源性 |
| 分子量 | 约 60-70 kDa |
| 纯度 | SDS-PAGE ≥95%(典型批次达97.3%) |
| 比酶活 | >100 U/mg(pNPG底物法) |
| 产品形式 | 冻干粉 / 液体 |
| 缓冲液(液体) | 20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, pH 7.5 |
| 内毒素 | <1 EU/μg |
| 包装规格 | 1mg / 5mg / 10mg / 100mg(克级至公斤级定制) |
| 储存条件 | -20°C 避光保存 |
| 有效期 | 12个月 |
酶活定义: 1个酶活力单位(1 Unit)定义为:在37°C、pH 7.0条件下,每分钟催化4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)水解产生1μmol对硝基苯酚(pNP)所需的酶量。
三、产品核心优势
1. 原核重组表达,来源清晰可控
区别于传统动物胰腺提取或天然菌株发酵工艺,本品采用大肠杆菌重组表达系统,具备以下显著优势:
生产周期短,可实现快速迭代
目标蛋白表达量高,可达总蛋白的30%-50%
培养基成分简单,无需血清添加,成本可控
完全非动物源性,杜绝病原体及免疫原性风险
发酵放大工艺成熟,支持工业化规模化生产
2. 卓越的品质参数
经多步层析纯化与严格质控,产品核心指标达到行业领先水平:
超高纯度:SDS-PAGE验证纯度≥95%,典型批次达97.3%,电泳条带单一清晰,无杂酶干扰
超高比活:比酶活>100 U/mg(pNPG底物法),反应灵敏高效
极低内毒素:<1 EU/μg,满足诊断级应用的高灵敏度要求
低宿主残留:宿主蛋白残留≤0.1%,宿主DNA残留≤100 pg/mg
微生物限度:≤100 CFU/g,符合洁净生产标准
3. 严苛的质量控制体系
每批次产品均经过全项质量检测,确保数据可追溯:
| 检测项目 | 检测方法 | 质量标准 |
|---|---|---|
| 外观 | 目视检查法 | 白色至类白色冻干粉末或澄清液体 |
| 蛋白纯度 | SDS-PAGE电泳 | ≥95% |
| 分子量 | SDS-PAGE | 60-70 kDa |
| 比酶活 | pNPG底物法 | >100 U/mg |
| 蛋白浓度 | BCA法/Bradford法 | 标示量90%-110% |
| 内毒素 | 鲎试剂法(LAL法) | <1 EU/μg |
| 宿主蛋白残留 | ELISA法 | ≤0.1% |
| 宿主DNA残留 | qPCR法 | ≤100 pg/mg |
| pH值(液体) | pH计测定 | 7.0 ± 0.5 |
| 微生物限度 | 薄膜过滤法 | ≤100 CFU/g |
四、应用领域详解
1. 糖尿病药物高通量筛选(HTS)
α-糖苷酶抑制剂是II型糖尿病治疗的重要药物类别,阿卡波糖、米格列醇、伏格列波糖等临床常用药均通过抑制小肠α-糖苷酶活性来延缓碳水化合物消化吸收,从而控制餐后血糖。
本品适用于α-糖苷酶抑制剂的高通量筛选模型,可快速评估天然产物、合成化合物库的抑制活性。高比酶活与优异的批次稳定性,确保筛选结果的高度一致性和可靠性,有效加速候选药物分子的发现与优化。
实验建议:抑制剂与酶液先于37°C预孵育5-10分钟,再加入底物启动反应;以阿卡波糖作为阳性对照抑制剂;设置DMSO溶剂对照组(DMSO终浓度≤1%);推荐酶终浓度为0.05-0.2 U/mL,确保底物消耗量<15%。
2. 碳水化合物结构分析
在糖生物学研究中,α-糖苷酶被广泛应用于寡糖、多糖及糖缀合物的结构解析。通过酶解-质谱联用技术,可精确确定糖链的序列、连接方式及分支结构。
高纯度的重组酶制剂不含杂酶活性,有效避免非特异性切割对分析结果的干扰,特别适用于糖蛋白糖基化位点及糖型分析等高精度研究场景。
3. 体外诊断(IVD)试剂开发
低内毒素规格(<1 EU/μg)使本品特别适用于血糖相关体外诊断试剂的开发:
糖化血红蛋白(HbA1c)检测中的辅助酶,用于释放糖化肽段
α-淀粉酶检测体系中的血糖释放步骤
其他基于葡萄糖氧化酶法的血糖检测体系
4. 生物催化与酶法合成
利用α-糖苷酶的转糖苷活性,可用于合成特定结构的糖苷类化合物:
糖脂类化合物的酶法合成
糖苷类前药制备
功能性寡糖的定向合成
反应条件温和(37-50°C,pH 6.5-7.5),选择性高,符合绿色化学理念。
5. 食品工业应用
在食品加工领域具有广泛应用前景:
淀粉水解工艺优化
低聚异麦芽糖等功能性食品配料生产
啤酒酿造中的糖化过程优化
五、使用操作方法
5.1 冻干粉溶解步骤
(1)平衡至室温:将冻干粉从-20°C取出,放置至室温(约15-20分钟),严禁在低温状态下打开瓶盖。
(2)配制酶溶液:加入适量预冷的无菌超纯水或20mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5),轻轻旋转或吹打溶解。切勿剧烈涡旋震荡,以防酶蛋白变性失活。
(3)测定蛋白浓度:建议溶解后使用BCA法或Bradford法测定实际蛋白浓度,以准确计算后续使用量。
(4)分装储存:将未使用完的酶液分装至洁净的微量离心管中,每管为单次实验用量,密封后于-20°C冻存。
5.2 酶活性测定标准方案(pNPG底物法)
(1)配制反应缓冲液:50mM 磷酸钠缓冲液(pH 7.0)。
(2)配制底物溶液:5mM 4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG),溶于反应缓冲液中,建议现配现用。
(3)配制终止液:1M 碳酸钠溶液(Na₂CO₃),用于终止酶反应并显色。
(4)酶反应体系(总体积200μL):50μL底物溶液 + 100μL反应缓冲液 + 50μL酶液(适当稀释至线性范围内)。
(5)反应与终止:37°C孵育10-30分钟,加入50μL 1M Na₂CO₃终止反应。
(6)读数与计算:使用酶标仪或分光光度计测定405nm处吸光度。以pNP标准曲线计算产物生成量,按公式计算比酶活。
六、储存与运输要求
6.1 储存条件
长期储存:-20°C避光保存,有效期12个月
短期使用:溶解后可在4°C条件下保存7天,酶活性基本维持不变
严禁反复冻融! 反复冻融将导致酶活性显著下降。建议将酶液分装为单次使用量,避免多次取用
产品应储存于干燥环境中,避免受潮
6.2 运输条件
冻干粉产品:常温或冰袋运输(建议4°C以下)
液体产品:干冰运输(-20°C以下)
收到产品后请立即按照储存条件保存
七、常见问题与解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 酶活性低于预期 | 反复冻融导致失活;保存温度不当;稀释后存放过久 | 使用新鲜分装的酶液;确认-20°C保存条件;现配现用稀释液 |
| 冻干粉溶解困难 | 产品受潮;溶剂量不足;温度过低 | 延长溶解时间至5-10分钟;使用足够体积的缓冲液;恢复至室温后再溶解 |
| 空白对照吸光度偏高 | 底物自发水解;缓冲液污染;器皿不洁 | 使用新鲜配制的底物溶液;更换无菌缓冲液;彻底清洁实验器皿 |
| SDS-PAGE条带不单一 | 酶蛋白部分降解;样品上样量过大 | 使用新鲜溶解的酶液;减少上样量;添加蛋白酶抑制剂 |
| 抑制剂筛选数据波动 | 酶量不一致;孵育时间不统一;DMSO浓度过高 | 每次实验前校准酶活性;严格控制孵育时间;确保DMSO终浓度≤1% |
八、安全信息
本产品仅限科研和工业用途,不得用于人体或动物的诊断、治疗或预防目的。操作时应佩戴适当的个人防护装备(实验服、手套、护目镜)。避免吸入冻干粉粉尘,溶解操作建议在通风橱中进行。若不慎接触皮肤或眼睛,立即用大量清水冲洗,必要时就医。废弃物应按照实验室生物废弃物处理规定处置。
九、订购与技术⽀持
| 项目 | 信息 |
|---|---|
| 产品货号 | ABIO-AG-E001 |
| 标准规格 | 1mg / 5mg / 10mg / 100mg |
| 大规格定制 | 克级至公斤级 |
| 生产商 | 艾柏森(江苏)生物科技有限公司 |
| 联系电话 | 0510-8596916 |
| 官方网站 | www.abiocenter.com |
| 质量保证 | 每批次附独立COA质检报告 |
艾柏森生物提供全程技术支持服务,包括产品选型建议、实验方案优化、疑难问题解答等。专业技术团队24小时响应客户需求,从产品咨询到售后支持提供全流程服务。