艾柏森重组α-糖苷酶
艾柏森重组α-糖苷酶
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一、产品概述

α-糖苷酶(α-Glucosidase,EC 3.2.1.20)是一类能够特异性水解末端非还原性α-1,4-糖苷键的酶,能够从淀粉、糖原、麦芽糖等碳水化合物的非还原末端逐步释放葡萄糖单元。该酶在生物体内参与食物消化、能量代谢及细胞信号调控等关键生理过程,是糖代谢通路中的重要节点。

艾柏森(江苏)生物科技有限公司采用先进的原核大肠杆菌重组表达系统,经过基因序列优化、高效表达载体构建和多步纯化工艺,成功开发出高纯度、高活性的重组α-糖苷酶产品(货号:ABIO-AG-E001),为科研与工业用户提供稳定可靠的酶学工具。

二、产品基本信息

项目参数
产品名称α-糖苷酶(重组表达)
英文名称α-Glucosidase (Recombinant)
产品货号ABIO-AG-E001
EC编号EC 3.2.1.20
表达宿主大肠杆菌(E. coli)
来源重组表达,非动物源性
分子量约 60-70 kDa
纯度SDS-PAGE ≥95%(典型批次达97.3%)
比酶活>100 U/mg(pNPG底物法)
产品形式冻干粉 / 液体
缓冲液(液体)20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, pH 7.5
内毒素<1 EU/μg
包装规格1mg / 5mg / 10mg / 100mg(克级至公斤级定制)
储存条件-20°C 避光保存
有效期12个月

酶活定义: 1个酶活力单位(1 Unit)定义为:在37°C、pH 7.0条件下,每分钟催化4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)水解产生1μmol对硝基苯酚(pNP)所需的酶量。

三、产品核心优势

1. 原核重组表达,来源清晰可控

区别于传统动物胰腺提取或天然菌株发酵工艺,本品采用大肠杆菌重组表达系统,具备以下显著优势:

  • 生产周期短,可实现快速迭代

  • 目标蛋白表达量高,可达总蛋白的30%-50%

  • 培养基成分简单,无需血清添加,成本可控

  • 完全非动物源性,杜绝病原体及免疫原性风险

  • 发酵放大工艺成熟,支持工业化规模化生产

2. 卓越的品质参数

经多步层析纯化与严格质控,产品核心指标达到行业领先水平:

  • 超高纯度:SDS-PAGE验证纯度≥95%,典型批次达97.3%,电泳条带单一清晰,无杂酶干扰

  • 超高比活:比酶活>100 U/mg(pNPG底物法),反应灵敏高效

  • 极低内毒素:<1 EU/μg,满足诊断级应用的高灵敏度要求

  • 低宿主残留:宿主蛋白残留≤0.1%,宿主DNA残留≤100 pg/mg

  • 微生物限度:≤100 CFU/g,符合洁净生产标准

3. 严苛的质量控制体系

每批次产品均经过全项质量检测,确保数据可追溯:

检测项目检测方法质量标准
外观目视检查法白色至类白色冻干粉末或澄清液体
蛋白纯度SDS-PAGE电泳≥95%
分子量SDS-PAGE60-70 kDa
比酶活pNPG底物法>100 U/mg
蛋白浓度BCA法/Bradford法标示量90%-110%
内毒素鲎试剂法(LAL法)<1 EU/μg
宿主蛋白残留ELISA法≤0.1%
宿主DNA残留qPCR法≤100 pg/mg
pH值(液体)pH计测定7.0 ± 0.5
微生物限度薄膜过滤法≤100 CFU/g

四、应用领域详解

1. 糖尿病药物高通量筛选(HTS)

α-糖苷酶抑制剂是II型糖尿病治疗的重要药物类别,阿卡波糖、米格列醇、伏格列波糖等临床常用药均通过抑制小肠α-糖苷酶活性来延缓碳水化合物消化吸收,从而控制餐后血糖。

本品适用于α-糖苷酶抑制剂的高通量筛选模型,可快速评估天然产物、合成化合物库的抑制活性。高比酶活与优异的批次稳定性,确保筛选结果的高度一致性和可靠性,有效加速候选药物分子的发现与优化。

实验建议:抑制剂与酶液先于37°C预孵育5-10分钟,再加入底物启动反应;以阿卡波糖作为阳性对照抑制剂;设置DMSO溶剂对照组(DMSO终浓度≤1%);推荐酶终浓度为0.05-0.2 U/mL,确保底物消耗量<15%。

2. 碳水化合物结构分析

在糖生物学研究中,α-糖苷酶被广泛应用于寡糖、多糖及糖缀合物的结构解析。通过酶解-质谱联用技术,可精确确定糖链的序列、连接方式及分支结构。

高纯度的重组酶制剂不含杂酶活性,有效避免非特异性切割对分析结果的干扰,特别适用于糖蛋白糖基化位点及糖型分析等高精度研究场景。

3. 体外诊断(IVD)试剂开发

低内毒素规格(<1 EU/μg)使本品特别适用于血糖相关体外诊断试剂的开发:

  • 糖化血红蛋白(HbA1c)检测中的辅助酶,用于释放糖化肽段

  • α-淀粉酶检测体系中的血糖释放步骤

  • 其他基于葡萄糖氧化酶法的血糖检测体系

4. 生物催化与酶法合成

利用α-糖苷酶的转糖苷活性,可用于合成特定结构的糖苷类化合物:

  • 糖脂类化合物的酶法合成

  • 糖苷类前药制备

  • 功能性寡糖的定向合成
    反应条件温和(37-50°C,pH 6.5-7.5),选择性高,符合绿色化学理念。

5. 食品工业应用

在食品加工领域具有广泛应用前景:

  • 淀粉水解工艺优化

  • 低聚异麦芽糖等功能性食品配料生产

  • 啤酒酿造中的糖化过程优化

五、使用操作方法

5.1 冻干粉溶解步骤

(1)平衡至室温:将冻干粉从-20°C取出,放置至室温(约15-20分钟),严禁在低温状态下打开瓶盖。

(2)配制酶溶液:加入适量预冷的无菌超纯水或20mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5),轻轻旋转或吹打溶解。切勿剧烈涡旋震荡,以防酶蛋白变性失活。

(3)测定蛋白浓度:建议溶解后使用BCA法或Bradford法测定实际蛋白浓度,以准确计算后续使用量。

(4)分装储存:将未使用完的酶液分装至洁净的微量离心管中,每管为单次实验用量,密封后于-20°C冻存。

5.2 酶活性测定标准方案(pNPG底物法)

(1)配制反应缓冲液:50mM 磷酸钠缓冲液(pH 7.0)。

(2)配制底物溶液:5mM 4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG),溶于反应缓冲液中,建议现配现用。

(3)配制终止液:1M 碳酸钠溶液(Na₂CO₃),用于终止酶反应并显色。

(4)酶反应体系(总体积200μL):50μL底物溶液 + 100μL反应缓冲液 + 50μL酶液(适当稀释至线性范围内)。

(5)反应与终止:37°C孵育10-30分钟,加入50μL 1M Na₂CO₃终止反应。

(6)读数与计算:使用酶标仪或分光光度计测定405nm处吸光度。以pNP标准曲线计算产物生成量,按公式计算比酶活。

六、储存与运输要求

6.1 储存条件

  • 长期储存:-20°C避光保存,有效期12个月

  • 短期使用:溶解后可在4°C条件下保存7天,酶活性基本维持不变

  • 严禁反复冻融! 反复冻融将导致酶活性显著下降。建议将酶液分装为单次使用量,避免多次取用

  • 产品应储存于干燥环境中,避免受潮

6.2 运输条件

  • 冻干粉产品:常温或冰袋运输(建议4°C以下)

  • 液体产品:干冰运输(-20°C以下)

  • 收到产品后请立即按照储存条件保存

七、常见问题与解决方案

问题可能原因解决方案
酶活性低于预期反复冻融导致失活;保存温度不当;稀释后存放过久使用新鲜分装的酶液;确认-20°C保存条件;现配现用稀释液
冻干粉溶解困难产品受潮;溶剂量不足;温度过低延长溶解时间至5-10分钟;使用足够体积的缓冲液;恢复至室温后再溶解
空白对照吸光度偏高底物自发水解;缓冲液污染;器皿不洁使用新鲜配制的底物溶液;更换无菌缓冲液;彻底清洁实验器皿
SDS-PAGE条带不单一酶蛋白部分降解;样品上样量过大使用新鲜溶解的酶液;减少上样量;添加蛋白酶抑制剂
抑制剂筛选数据波动酶量不一致;孵育时间不统一;DMSO浓度过高每次实验前校准酶活性;严格控制孵育时间;确保DMSO终浓度≤1%

八、安全信息

本产品仅限科研和工业用途,不得用于人体或动物的诊断、治疗或预防目的。操作时应佩戴适当的个人防护装备(实验服、手套、护目镜)。避免吸入冻干粉粉尘,溶解操作建议在通风橱中进行。若不慎接触皮肤或眼睛,立即用大量清水冲洗,必要时就医。废弃物应按照实验室生物废弃物处理规定处置。

九、订购与技术⽀持

项目信息
产品货号ABIO-AG-E001
标准规格1mg / 5mg / 10mg / 100mg
大规格定制克级至公斤级
生产商艾柏森(江苏)生物科技有限公司
联系电话0510-8596916
官方网站www.abiocenter.com
质量保证每批次附独立COA质检报告

艾柏森生物提供全程技术支持服务,包括产品选型建议、实验方案优化、疑难问题解答等。专业技术团队24小时响应客户需求,从产品咨询到售后支持提供全流程服务。