MBL 重组金属酶
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一、产品基本信息
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | MBL 重组金属β-内酰胺酶（Recombinant Metallo-β-Lactamase） |
| 别名 | 金属酶、金属β-内酰胺酶、MBL |
| 品牌 | ABIOCENTER™ |
| 英文名 | Recombinant Metallo-β-Lactamase (MBL, Ambler Class B) |
| EC 编号 | EC 3.5.2.6 |
| 分类 | Bush 分类 3 群，Ambler 分类 B 类（B1 分子亚类） |
| 来源 | 重组大肠杆菌精密发酵表达 |
| 活性中心 | Zn²⁺ 金属离子辅因子（每分子含 2 个锌结合位点） |
| 分子量 | ~40 kDa（SDS-PAGE 检测） |
| 理论等电点（pI） | 5.88 |
| 外观 | 纯化酶液：无色至淡黄色澄清液体；菌体：湿菌体沉淀 |
| 纯度（HPLC） | ≥ 95% |
| 酶活力 | ≥ 2000 万 U/mL（液体） |
| 内毒素 | < 0.1 EU/mg |
| 最适 pH | 6.5 — 7.5 |
| 最适温度 | 37°C |
| 溶解性 | 纯化酶液可直接使用或稀释；菌体需经破碎纯化后使用 |
| 抑制剂 | 可被 EDTA、1,10-菲咯啉等金属螯合剂抑制；不被克拉维酸、舒巴坦等传统β-内酰胺酶抑制剂抑制 |
| 储存条件 | 纯化酶液：-20°C ± 5°C；菌体：-20°C ± 5°C 或 -80°C |
| 有效期 | 纯化酶液：24 个月；菌体：12 个月 |
| 包装规格 | 纯化酶液：2000 万单位/瓶；菌体：按发酵体积计 / 定制规格 |
二、产品特性概述（核心卖点）
广谱底物范围：水解青霉素类、头孢菌素类及碳青霉烯类（培南类），仅对氨曲南无活性
无动物源性：重组大肠杆菌表达，无病原体及毒素污染风险
超高酶活力：≥2000 万 U/mL，显著优于传统产品
高纯度：HPLC ≥ 95%，背景干净
专一性强：特异性水解β-内酰胺环，不干扰其他检测
批间一致性好：CV < 3%
符合药典标准：满足 ChP 及 USP 培南类无菌检测要求
三、质量标准与质控数据
| 检测项目 | 方法 | 标准 | 频率 |
|---|---|---|---|
| 外观 | 目视检查 | 无色至淡黄色澄清液体 / 湿菌体 | 每批 |
| 纯度 | RP-HPLC | ≥ 95% | 每批 |
| 分子量 | SDS-PAGE / MS | ~40 kDa | 首批/定期 |
| 酶活力 | 碘量法/药典法 | ≥ 2000 万 U/mL | 每批 |
| 金属离子含量 | ICP-MS | Zn²⁺ ≥ 1.8 mol/mol酶 | 首批/定期 |
| EDTA 抑制验证 | EDTA 前处理后测活 | 酶活力丧失 ≥ 95% | 每批 |
| 内毒素 | LAL 法 | < 0.1 EU/mg | 每批 |
| pH 值 | pH 计 | 6.5 — 7.5 | 每批 |
| 含水量 | 卡尔费休法 | < 5% | 每批 |
| 微生物限度 | 膜过滤法 | 符合药典要求 | 每批 |
| 无菌检查 | 薄膜过滤法 | 无菌 | 每批 |
四、酶活定义与方法
酶活定义（药典单位）：在 pH 7.0，37°C 的磷酸盐缓冲液中，1 小时内水解 1 单位青霉素钠（青霉素 G）所需的酶量为 1 U。
检测方法：碘量法，以青霉素 G 钾盐为底物。
特异性验证：EDTA 抑制实验（确认金属酶特征）+ 克拉维酸抗性实验（排除 A/C/D 类丝氨酸酶残留）。
五、SDS-PAGE 分析
目标条带：~40 kDa
表达情况：IPTG 诱导后显著表达
纯化后：单一条带，纯度高、均一性好
六、批次一致性
标准化原核精密发酵 + 多步色谱纯化
关键质控指标 CV ≤ 3%
每批严格检验酶活力、纯度、无菌性
七、产品应用场景
| 应用场景 | 作用机制 | 推荐用量 | 注意事项 |
|---|---|---|---|
| 培南类无菌检测 | 水解碳青霉烯类β-内酰胺环 | 100万—300万 U/L | 需方法学验证，温度≤45°C |
| 头孢菌素类无菌检测 | 配合青霉素酶使用 | 100万—200万 U/L | 确保混合均匀 |
| 微生物限度检测 | 中和培养基中抗生素残留 | 50万—200万 U/L | 酶液新鲜配制 |
| 环境水体检测 | 水解残留抗生素 | 0.5—5 U/mL | 37°C孵育30—60min |
| 发酵工业灭活 | 水解残留培南类 | 过量1.2—1.5倍酶量 | 验证无残留活性 |
| 科研实验灭活 | 去除培养基中抗生素干扰 | 1—10 U/mL | 避免反复冻融 |
八、与其他β-内酰胺酶对比
| 对比维度 | 传统青霉素酶（A/C/D类） | 金属酶（B类）传统来源 | ABIOCENTER™ 重组金属酶 |
|---|---|---|---|
| 分类 | Ambler A/C/D类（丝氨酸酶） | Ambler B类（金属酶） | Ambler B类（重组金属酶） |
| 活性中心 | 丝氨酸残基 | Zn²⁺ | Zn²⁺ |
| 底物谱 | 青霉素类、部分头孢菌素类 | 青霉素+头孢+碳青霉烯（广谱） | 青霉素+头孢+碳青霉烯（广谱） |
| 克拉维酸抑制 | 是 | 否 | 否 |
| EDTA抑制 | 否 | 是 | 是 |
| 氨曲南水解 | 部分水解 | 不水解 | 不水解 |
| 酶活力 | 50—500万 U/mL | 50—200万 U/mL | ≥2000万 U/mL |
| 安全性 | 蜡样芽孢杆菌来源，有毒素风险 | 多种细菌来源，杂质复杂 | 重组大肠杆菌，无致病菌风险 |
九、可水解的抗生素谱
| 类别 | 代表药物 | 水解效率 | 备注 |
|---|---|---|---|
| 青霉素类 | 青霉素G、氨苄西林、阿莫西林 | 高效 | 与青霉素酶重叠 |
| 头孢菌素类 | 头孢噻肟、头孢唑林、头孢曲松 | 高效 | 青霉素酶无法覆盖 |
| 碳青霉烯类（培南类） | 亚胺培南、美罗培南、厄他培南、法罗培南 | 高效 | ★核心优势底物 |
| 单环类 | 氨曲南 | 不水解 | 金属酶自然属性 |
十、使用说明摘要
使用步骤
解冻：室温或2—8°C解冻至澄清
混匀：轻柔颠倒混匀，避免泡沫
分装：单次用量分装，剩余冷冻保存
使用：确认澄清后加入体系，记录批号
注意事项
首次使用需方法学验证
操作温度≤45°C，最适37°C
避免EDTA、柠檬酸盐等螯合剂
避免反复冻融（≤3次）
避免强氧化剂、重金属离子、SDS等
十一、储存与运输
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 储存温度（纯化酶液） | -20°C ± 5°C |
| 短期储存（解冻后） | 2—8°C，即时使用 |
| 运输条件 | 冰袋保温（2—8°C） |
| 有效期 | 纯化酶液：24个月；菌体：12个月 |
| 容器 | 无菌玻璃瓶或聚丙烯瓶，铝箔封口 |
