艾柏森重组碱性磷酸酶（ALP）
艾柏森重组碱性磷酸酶（ALP）
￥0.00
  • 产品详情
  • 产品参数

一、产品概述

碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase, ALP，EC 3.1.3.1）是一种能够催化磷酸单酯键水解的去磷酸化酶，在碱性条件（最适pH 8.0-10.0）下发挥活性。本产品为艾柏森生物采用大肠杆菌原核表达系统生产的重组碱性磷酸酶，融合His6标签便于亲和纯化，经多步层析精纯获得。

本产品主要用于分子克隆中DNA/RNA载体的5′端去磷酸化，以防止载体自连、提高克隆效率；也可作为酶标记物用于ELISA、化学发光免疫检测的信号放大系统，以及蛋白磷酸化状态分析、核酸探针标记和临床诊断试剂开发等多种应用场景。

一句话卖点：艾柏森碱性磷酸酶，三步精纯纯度≥95%、实测活性2356 U/mg超标准17.8%、内毒素仅0.28 EU/mg远低限值，一管搞定载体去磷酸化、ELISA信号放大与蛋白磷酸化分析。

二、产品基本信息

产品名称：碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase, ALP）

产品编号：ALP-001 / ALP-005 / ALP-010（按规格）

CAS号：EC 3.1.3.1

表达系统：大肠杆菌 E. coli BL21(DE3) 原核表达系统

表达载体：pET-28a(+)-ALP-His6

宿主菌株：E. coli BL21(DE3)

诱导方式：IPTG诱导（0.5 mM, 16°C, 20h）

标签设计：N端His6标签（便于Ni-NTA亲和纯化）

纯化策略：Ni-NTA亲和层析 → 阴离子交换 → 分子筛色谱

分子量：约50 kDa（单体，含His标签）；活性形式为同源二聚体

缓冲体系：20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 7.5

蛋白浓度：1.0 mg/mL（标准规格）

外观：澄清透明溶液，无沉淀、无悬浮物

规格：1 mL / 5 mL / 10 mL / 定制规格

有效期：24个月（-20°C避光保存）

生产单位：艾柏森（江苏）生物科技有限公司（abiocenter）

三、产品核心优势

3.1 纯度超高，背景干净

采用Ni-NTA亲和层析→阴离子交换→分子筛色谱三步精纯策略，SDS-PAGE及HPLC双法验证纯度均≥95%，电泳呈现清晰单一条带，确保实验体系中无杂蛋白干扰，结果真实可靠。

3.2 活性强劲，用量更省

以pNPP为底物比色法测定，酶活性≥2000 U/mg。最新批次（ALP-202606-B01）实测活性达2356 U/mg，优于标准值17.8%。高效催化意味着更少的酶用量、更短的反应时间、更灵敏的检测信号。

3.3 内毒素极低，安全兼容

LAL凝胶法检测内毒素≤1 EU/mg，最新批次实测仅0.28 EU/mg，远低于行业标准限值。满足细胞培养、临床诊断试剂开发等对内毒素高度敏感的应用场景，保障下游实验安全。

3.4 稳定性好，经久耐用

  • 4°C避光保存30天，酶活性保留≥90%（实测94.3%）

  • -20°C避光保存6个月，酶活性保留≥95%（实测98.1%）

  • -20°C有效期24个月

3.5 质控严格，全程追溯

每批次产品执行15项质量指标全检（外观、SDS-PAGE纯度、HPLC纯度、酶活性、分子量、内毒素、HCP残留、宿主DNA残留、无菌、pH、蛋白浓度、稳定性等），详细COA报告随产品交付，质量全程可追溯。

3.6 灵活定制，按需供应

支持浓度、缓冲体系、分装规格定制；研发级（mL）至工业级（L）规模化稳定供货；可为IVD企业提供大包装及工艺优化服务。

四、应用领域详解

应用领域具体用途核心价值
分子克隆线性化载体5′端去磷酸化防止载体自连，降低空载体背景，阳性克隆率提升3-5倍
ELISA检测ALP标记抗体/抗原的信号放大pNPP比色法或化学发光法高灵敏度定量检测
化学发光免疫分析（CLIA）核心酶标记组分快速、高灵敏度的临床诊断检测系统
核酸探针标记去除探针末端磷酸基团后重新标记增强探针灵敏度和特异性
蛋白磷酸化分析去磷酸化处理目标蛋白Western Blot或质谱验证磷酸化调控机制
生物传感器酶联信号转换元件便携式即时检测（POCT）方案开发
药物筛选磷酸酶活性筛选与抑制剂评价药物靶点验证与优化

五、使用操作方法

5.1 分子克隆去磷酸化（防止载体自连）

  1. 取线性化DNA载体（1-5 μg）至PCR管中，加入10×去磷酸化反应缓冲液。

  2. 加入碱性磷酸酶0.5-1 U/μg DNA（推荐起始用量1 U/μg）。

  3. 补充无核酸酶水至推荐反应体积，37°C孵育30-60分钟。

  4. 65°C加热15分钟终止反应（或酚/氯仿抽提后乙醇沉淀）。

  5. 回收去磷酸化DNA片段，用于后续连接反应。

  6. 建议：设未处理载体对照，通过连接转化效率评估去磷酸化效果。

5.2 ELISA/化学发光检测（信号放大）

  1. 将ALP标记的抗体或抗原用检测缓冲液稀释至工作浓度。

  2. 按标准ELISA流程加样、孵育、洗涤，去除未结合物。

  3. 加入pNPP底物（比色法） 或化学发光底物（CLIA法）。

  4. 比色法：37°C避光显色10-30分钟，加入终止液后于405nm读取吸光度；化学发光法：立即检测相对光单位（RLU）。

  5. 根据标准曲线计算待测物浓度。

5.3 蛋白磷酸化分析（去磷酸化验证）

  1. 取磷酸化蛋白样品（建议2-10 μg），加入适合的反应缓冲液（推荐Tris-HCl pH 8.0）。

  2. 加入碱性磷酸酶至终浓度10-20 U/mL反应体系，37°C孵育1-2小时（可优化时间梯度）。

  3. 孵育结束后可取部分样品进行SDS-PAGE，或直接进行后续分析。

  4. 通过Western Blot（使用磷酸化特异性抗体）或质谱分析验证去磷酸化效果。

5.4 酶活性测定

  1. 配制反应液：1 mM pNPP 溶于 1 M Tris-HCl pH 8.0 缓冲液。

  2. 取适量酶液加入反应体系（建议设置浓度梯度确保反应在线性范围内），37°C反应。

  3. 于405nm波长下连续测定吸光度变化速率。

  4. 根据pNP标准曲线计算酶活性单位（U/mg）。

  5. 酶活性单位定义：1个活性单位（U）定义为37°C、pH 8.0条件下每分钟催化1 μmol pNPP转化为pNP的酶量。

5.5 一般注意事项

  • 使用前将酶轻轻混匀（勿剧烈振荡，避免产生气泡），短暂离心收集管壁残留液。

  • 不同应用场景下，建议先进行预实验以确定最佳酶用量、反应温度与时间。

  • 使用无核酸酶、无菌的耗材和试剂，避免污染。

六、储存与运输要求

项目要求
短期储存2-8°C避光保存，开封后30天内使用完毕
长期储存-20°C避光保存，分装后冻存，有效期24个月
冻融限制严禁冻融超过3次，建议按单次用量分装
运输条件冷链运输（2-8°C），避免高温与阳光直射
操作要求使用前轻轻混匀，避免剧烈振荡，短暂离心后使用
收货处理收货后立即按推荐条件保存，避免室温长时间放置

储存注意事项

✅ 务必分装：将产品按单次实验用量分装后冻存，避免反复冻融导致活性下降。
✅ 避光保存：光照可能影响酶活性，始终避光保存。
✅ 冷链交接：收货后立即检查冷链状态，按条件保存。
❌ 严禁剧烈振荡：可引起蛋白变性或聚集。
❌ 请勿混用：不同批次产品请勿混合使用。
❌ 勿用过期产品：超过有效期产品的活性与安全性无法保证。

七、常见问题与解决方案

Q1：去磷酸化后连接效率仍然较低？

A：可能原因及解决方案：

  • 酶用量不足：建议将酶量提高至1-2 U/μg DNA，或延长反应时间至60分钟。

  • 反应温度不适宜：确认反应体系pH为7.5-8.5，使用配套缓冲液。

  • 酶活性下降：确认储存条件正确、未反复冻融、产品在有效期内。

  • 终止不充分：确保65°C加热15分钟或酚/氯仿抽提完全去除酶活性。

  • 回收损失：优化DNA回收操作（如乙醇沉淀），使用低吸附耗材。

Q2：ELISA检测信号弱或背景过高？

A：

  • 信号弱：① 增加ALP标记抗体浓度或延长显色时间；② 确认底物新鲜配制；③ 检查检测缓冲液pH是否在8.0-9.0范围内。

  • 背景高：① 增加洗涤次数和洗涤时间；② 优化封闭条件；③ 降低标记抗体工作浓度。

Q3：蛋白去磷酸化不完全？

A：

  • 延长反应时间至2-4小时或增加酶用量至20-50 U/mL。

  • 确认样品中无磷酸酶抑制剂（如磷酸盐、EDTA等），如有则透析或稀释去除。

  • 检查反应缓冲液pH是否为8.0-9.0。

Q4：产品出现沉淀或浑浊？

A：

  • 可能原因：反复冻融、剧烈振荡、长期高温保存或微生物污染。

  • 处理方法：如有沉淀或浑浊，请勿使用并联系艾柏森技术支持。

  • 预防措施：按推荐条件分装保存，避免冻融和污染。

Q5：酶活性测定结果偏低？

A：

  • ① 检查pNPP底物是否降解（底物溶液应新鲜配制，避光保存）；② 确认反应温度准确为37°C；③ 检查405nm波长设置是否正确；④ 校准pNP标准曲线；⑤ 确认酶液稀释倍数合适（反应在线性范围内）。

Q6：不同批次间产品是否有差异？

A：

  • 每批次产品均严格执行15项质控标准，关键指标均在相同范围内，批次间一致性良好。

  • 具体检测数据可查阅随货COA报告。

八、安全信息

8.1 安全标识

  • 本产品仅供科研、诊断试剂开发及工业用途，不得直接用于人体或动物体内治疗。

  • 本品为重组蛋白产品，操作时建议穿戴实验服、手套和护目镜。

8.2 安全操作提示

  • 避免直接接触皮肤、眼睛和黏膜，如不慎接触，应立即用大量清水冲洗并及时就医。

  • 所有接触过本产品的耗材和废弃物，建议按照生物废弃物处理规定进行高温高压灭菌或消毒处理后处置。

  • 在使用ALP标记抗体进行ELISA或化学发光检测时，请遵守所在机构的生物安全操作规范。

  • 如发现产品性状异常（变色、浑浊、沉淀、异味），请勿使用并及时联系供应商。

  • 请将产品置于儿童和未经培训人员接触不到的地方。

8.3 应急处理

情况处理措施
皮肤接触立即脱去污染衣物，用大量肥皂和清水冲洗至少15分钟
眼睛接触用大量清水冲洗至少15分钟，必要时就医
吸入/误食立即脱离接触，如有不适及时就医
泄漏处理用吸水材料吸收，按生物废弃物处理

九、订购与技术支持

公司信息

公司名称：艾柏森（江苏）生物科技有限公司（abiocenter）

联系电话：0510-8596916

官方网站：www.abiocenter.com

订购信息

产品编号规格说明
ALP-0011 mL标准规格，1.0 mg/mL
ALP-0055 mL标准规格，1.0 mg/mL
ALP-01010 mL标准规格，1.0 mg/mL
ALP-Custom定制浓度/缓冲体系/分装规格可调

技术服务内容

  • 产品咨询：提供产品规格、应用方案、实验条件优化等技术咨询服务。

  • COA报告：随产品提供详细COA（产品质量检验报告），支持在线查阅与下载。

  • 样品申请：可为新客户提供少量免费试用样品（需提前申请）。

  • 定制服务：根据客户需求提供不同浓度、缓冲体系、分装规格的定制产品。

  • 批量供应：支持从研发级（mL级）到工业级（L级）的规模化稳定供货。

  • 技术培训：提供产品使用培训与实验方案优化建议。

订购流程

① 电话或官网咨询 → ② 确认产品规格与数量 → ③ 签订订购合同 → ④ 冷链发货 → ⑤ 收货验收 → ⑥ 技术支持跟进

艾柏森（江苏）生物科技有限公司（abiocenter）

📞 电话：0510-8596916
🌐 网址：www.abiocenter.com

本产品仅供科研、诊断试剂开发及工业用途，不得直接用于人体或动物体内治疗。
© 2026 艾柏森（江苏）生物科技有限公司 · 保留所有权利