一、技术原理
等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry,ITC)在恒温、无需标记的条件下,通过实时记录生物分子结合时的热量变化,直接得到亲和力 KD、结合计量比 n、焓变 ΔH、熵变 ΔS 等全套热力学参数,并可进一步计算自由能 ΔG,进而解析相互作用的驱动力(氢键、疏水作用、构象变化等)。
二、主流服务内容
检测类型
• 蛋白-蛋白、蛋白-核酸、蛋白-小分子、蛋白-多肽、蛋白-离子、化合物-化合物、环糊精-药物、核酸适配体等相互作用
• 酶促反应动力学(Km、Ki、Kcat、Vmax)
• 蛋白质折叠/去折叠、热稳定性、活性浓度测定
服务流程
样品准备→ 实验设计 → 仪器滴定 → 实时数据采集 → 曲线拟合 → 出具分析报告
典型交付:原始数据、拟合曲线、热力学参数表、完整实验报告(含试剂、仪器、软件参数)。
服务优势
• 无需标记/固定,溶液状态更接近体内环境
• 一次实验同时获得亲和力与热力学信息
• 检测范围宽:mM 到 pM 级亲和力均可覆盖
• 最快 48 h 交付,支持 6 年以上经验团队及多台 MicroCal PEAQ-ITC、Auto-ITC、Nano ITC 等先进机型。
三、典型应用案例
• HSA 与华法林钠结合表征(蛋白-小分子)
• 环糊精与候选化合物包合作用测定(化合物-化合物)
• 抗体亲和力及抗原结合热测定,用于抗体质量控制(抗体-抗原)。
四、常见问题与建议
样品要求
蛋白/核酸样品需高纯度(≥90 %)、避免沉淀;缓冲液匹配(盐浓度、pH、还原剂)需提前与服务商确认。
实验设计
建议先进行预实验确定合适浓度范围,可减少正式实验次数。
数据深度挖掘
可结合分子对接、动力学模拟进一步解释ΔH/ΔS 的热力学来源;